1材料与方法

1.1试验材料

   本研究的304头实验二花脸母猪来自江苏常州武进二花脸合作社、常熟二花脸国家保种场以及苏州苏太企业有限公司。根据调查，来自三个猪场的二花脸猪均具有相似的遗传背景，所有母猪均具有准确的繁殖记录。前期采集了这304头母猪的耳样，准确标记后将样品装入含75%酒精的离心管，置于-20℃冰箱内保存备用。

1.2试验方法

1.2.1样品DNA稀释液的制备

提取猪耳组织样品的DNA，并稀释到实验需要的浓度，步骤如下：

（1）剪取黄豆样大小的组织样，尽量剪碎放入2mL离心管中；

（2）加入DNA裂解液800μL，及蛋白酶K30μL（20mg/ml）；

（3）将样品置于55℃恒温箱（或55℃水浴）中孵育过夜，至管中无组织块为止；

（4）加入Tirs平衡酚800μL，轻微混匀10min，随后4℃12000r/min离心12min；

（5）取650μL上清液加Tirs饱和酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）混合溶液800μL，混摇10min，4℃12000r/min离心12min；

（6）取550μL上清液，加氯仿800μL，混摇10min，4℃12000r/min离心12min；

（以下步骤换1.5ml的离心管）

（7）取450μL上清液，加无水乙醇800μL，3M乙酸钠40μL，混摇6min，4℃10000r/min离心8min；

（8）弃上清液留下DNA沉淀团，加入1000μL70%乙醇，混摇5min，4℃10000r/min离心5min，弃上清液（如需要可重复一次）；

（9）将离心管放入通风橱，吹干至管内无小滴；

（10）样品加100μL超纯水，轻微吹打至DNA溶解，经过Nanodrop-100分光光度计检测质量与浓度后将浓度统一稀释到30ng/μL，置于-20℃下保存备用。