1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验试剂

 PX稀释液：400μl PX母液（上海生工生物）+ 400ml ddH2O

 10X Steinberg’s Stock：119g HEPES，34g NaCl，2.06g MgSO4，0.8g Ca(NO3)2，0.5g KCl，1liter water pH7.5

 绒毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）：宁波第二激素厂

 DGA溶液：0.4g葡萄糖醛酸内酯粉末 + 40ml ddH2O

 麻醉剂MS-222（三卡因甲基磺酸盐；Sigma）：0.1g 3-氨基-苯甲酸乙酯粉末（MS222，Sigma-Aldrich公司）+ 500ml Steinberg’s Solution

 BICS2-GFP质粒

 0.01%固绿（Fast Green）

1.1.2 实验用动物

 46-48期非洲爪蟾（Xenopus Laevis）蝌蚪

1.1.3 实验仪器

 连续变倍体视显微镜：SMZ1500 Nikon，苏州欧米特光电科技有限公司

 荧光显微镜

 激光共聚焦显微镜

1.2 实验方法

1.2.1 动物培养与处理

46-48期蝌蚪通过配对白化成年非洲爪蟾获得：通过分别向雌蛙和雄蛙注射0.5ml和0.3ml的人绒毛膜促性腺激素，促使成年蛙排卵交配成功。将受精卵放置在22℃并有12h/12h 光照/黑夜的恒温培养箱中。根据形态变化，选取合适时期的蝌蚪用于实验。

全脑转染：46期蝌蚪使用麻醉剂MS-222（三卡因甲基磺酸盐；Sigma）麻醉，用毛笔使蝌蚪背部朝上，将DNA质粒（0.5μg/μl）与0.01%的固绿（Fast Green）混合，通过微量注射仪（Picospritzer）注射到46期蝌蚪的脑室中。将电极垂直置于大脑两侧，施加正反脉冲各两次。实验前通过荧光显微镜筛选，选取符合实验要求的蝌蚪用于实验。

神经元结构的在体拍摄和三维重构：利用电转染技术、在细胞内表达含有绿色荧光蛋白GFP的质粒以及非洲爪蟾的透明皮肤，可以拍摄在体的神经元细胞形态。利用激光共聚焦活细胞实时观察及影像记录（Time-lapse imaging）技术拍摄神经元结构，通过软件（Imaris）的Filaments功能，进行神经元形态的三维重构。