人溶菌酶具有多种药理作用和独特的优越性，在临床上具有重要应用价值。但天然人溶菌酶来源极端困难，提取步骤繁琐，无法进行大规模的工业化生产[3,4]。因此我们将人溶菌酶基因转入S.sitiens中，作为生物反应器，生产人源溶菌酶[5]，希望通过这种方法解决人溶菌酶来源困难的问题，并且为人溶菌酶的生产另辟蹊径，节约成本。

1材料与方法

1.1材料

S.sitiens，由美国加利佛尼亚大学戴维斯分校番茄遗传资源中心（TomatoGeneticsResourceCenter，TGRC）馈赠。

植物病原菌（棉花枯萎病菌，引起棉花枯萎病）、（小麦赤霉孢菌，引起小麦赤霉病）和（茄病镰刀菌，引起茄科植物根腐病）。

重组人溶菌酶基因[6]（NCBI数据库GenebankNo：NM_000239）和相关引物的合成由上海生工生物工程有限公司负责完成。

1.2实验方法

1.2.1培养基配制

MS培养基：大量50ml,KH2PO450ml，CaCl250ml，有机10ml，微量10ml，铁盐10ml，蔗糖30g，最后定容至1L，调pH5.8，加入琼脂粉8g，分装至10-12个兰花瓶，121℃灭菌17min，备用。

PDA培养基：称取马铃薯葡萄糖琼脂（北京奥博星生物技术有限责任公司）38g溶于1L蒸馏水，121℃灭菌17min后倒平板（D=90mm），用于植物病原菌的培养。

叶盘法转基因用培养基：

看护培养基：MS盐，肌醇100mg，VB10.65mg，KH2PO4100mg，2,4-D0.2mg，KT0.1mg，蔗糖30g，定容至1L，pH5.8，琼脂粉7.8g；

重悬液：MS盐，蔗糖20g，pH5.8，定容至1L；

筛选培养基：MS盐，IAA1.0mg，KT100mg，Carb500mg，K100mg，pH5.8，定容至1L，琼脂粉7.8g；

以上培养基均121℃灭菌17min。

1.2.2染色液配制

GUS染色液[7]：

X-Gluc母液：用N-N-二甲基酰胺（DMF）将X-Gluc配成20mM的储存液，保存于-20℃。

X-Gluc基液（50mMPBS，pH7.0）配制方案：50mMNa2HPO41.79g/100ml；50mMNaH2PO40.78g/100ml共同溶解；Na2EDTA（10mM，372mg），Triton-100（0.1%，100μl）；铁氰化钾（0.5mM，16.5mg）；亚铁氰化钾（0.5mM，21.1mg）；最后，50μlX-Gluc母液＋450μl基液，-20℃储存。