土壤中解钾解磷菌的分离筛选与鉴定(3)

明胶液化试验[12]:首先配置培养基(蛋白胨5.0g、 明胶130g、蒸馏水1000mL)。把培养液分装试管每管5毫升,115℃灭菌20分钟。针刺接种,以不接种的为对照


明胶液化试验[12]:首先配置培养基(蛋白胨5.0g、 明胶130g、蒸馏水1000mL)。把培养液分装试管每管5毫升,115℃灭菌20分钟。针刺接种,以不接种的为对照,25℃培养。3、7、10、14、21天后,放入4℃冰箱中半小时,观察菌的生长情况及明胶是否液化。

甲基红试验和V·P试验[12]:首先配制蛋白胨葡萄糖磷酸盐培养液(蛋白胨5~9g、葡萄糖5g、K2HPO4、蒸馏水1000mL)。分装试管,每管5毫升,灭菌后接种细菌,培养4、7、14、21天后观察并记录结果。甲基红试剂:甲基红0.1克溶于300毫升95%的乙醇中,然后用蒸馏水稀释到500毫升。观察结果时,在培养液中加入2~3滴甲基红试剂,培养液呈明显的红色为阳性反应,呈黄色则为阴性反应[12]。V·P试验:取培养液与10%NaOH各1毫升相混,放置过夜,培养液呈红色为阳性反应。

H2S产生试验[12]:先配制培养基(NH4H2PO40.5g、 K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.2g、NaCl5.0g、酵母膏5.0g、胱氨酸0.1g、NaSO40.5g、蛋白胨5.0g、蒸馏水1000mL)。然后把培养液分装试管,每管5毫升,115℃灭菌10分钟;将0.5~1.0cm宽的滤纸条在5%的醋酸铅溶液中浸透,烘干,灭菌。接种后将滤纸条夹在棉塞与试管内壁间,勿使纸条下端触到液面。3、5、7、14、21天后观察记录,纸条变黑者为阳性反应。

淀粉水解试验[12]:配制YNA培养基(酵母膏5.0g、琼脂23.0g、蒸馏水1000mL)。然后再加入1%(W/V)马铃薯淀粉或0.2%(W/V)可溶性淀粉。121℃灭菌15分钟,倒平板。凝固后用接种环沾菌悬液划线,25℃培养,分别于5天和10天后洗去菌落,加入碘液,菌落处或其边缘未呈蓝紫色的为阳性反应,说明淀粉被水解。

柠檬酸盐利用试验[12]:配制培养基(柠檬酸钠2.0g、NH4H2PO41.0g、K2HPO41.0g、MgSO4·7H2O 0.2g、蒸馏水1000mL、琼脂15-20g、溴百里酚蓝1.5mL然后把培养基调节pH为6.8)。分装试管,每管4毫升灭菌。斜面凝固后接种菌,25℃培养并在3、7、14、21天时候观察记录结果。培养液变为蓝色表明柠檬酸盐被利用,为阳性反应。

细菌运动性试验[12]:配制牛肉膏蛋白胨培养基,每试管装培养基3~4ml灭菌,冷却后,针刺接种细菌,直至培养基底部,30℃培养观察结果。

过氧化物酶试验[12]:在NA斜面上培养36小时的菌苔上加1毫升3%过氧化氢,立即观察有无气泡产生。有气泡时说明H2O2在酶的作用下分解为H2O和O2,为阳性反应

3%氢氧化钾溶解性试验[12]:取3%氢氧化钾滴在载玻片上,用牙签挑取培养24小时的菌落于其中轻轻搅拌,溶液变粘粥并能挑出丝的为阳性反应。以滴灭菌水于同一载玻片上重复同样步骤为阴性对照。