1.实验材料及方法

1.1实验材料及仪器

1.1.1实验材料

HPV59型兔单克隆抗体是由北京义翘神州生物技术有限公司提供。

1.1.2实验试剂及药品

丙烯酰胺-0.8%N，N’-亚甲基双丙烯酰胺溶液、4×Tris-Cl/SDS,4×Tris-Cl/SDS、5×Tris-甘氨酸系统电极缓冲液、10％过硫酸铵（APS）、4×SDS样品缓冲液（还原）、2×SDS样品缓冲液、2%DOC、100%TCA、考斯亮蓝R-250染色液、脱色液、SEC流动相（200mMNaH2PO4，100mMArginine，1%IPA，pH=6.5）、磷酸盐保存液、清洗液、293FT包装用细胞、DMEM+10%FBS细胞培养基、DMEM+10%FBS+1%NEAA+1%1MHEPES中和培养基、PBS缓冲液、0.25%Trypsin+0.02%EDTA胰酶。

1.1.3实验仪器

表1实验仪器表

仪器及材料名称 规格型号 生产厂家

微量分光光度计 Nanodrop2000C Thermo,USA

高压电泳仪 EPS600 Tanon

凝胶图象处理系统 ChampGel－1000 北京赛智创业科技有限公司

二级生物安全柜 BSC-1360-LⅡA2 HDLApparatus

CO2细胞培养箱 FormaSeriesⅡ Thermo

化学发光仪 CentroLB960MicroplateLuminometer BertholdTechnologies

酶联斑点分析仪 S6Universal-VAnalyzer CellularTechnologyLtd

PipetLite单道移液器 10-1000ul Rainin

96孔深孔板 2.2ml Thermo

2.实验方法

本研究所用纯化HPV59型兔单克隆中和抗体由北京义翘神州生物技术有限公司提供用，UV法测定了其浓度，SDS-PAGE凝胶电泳及SEC-HPLC测定了纯度，测定了中和细胞活性，运用ELISA法测定了其稳定性，特异性及鉴别能力。

2.1HPV59抗体含量UV检测

HPV59抗体含量用紫外分光光度计法检测，以HPV59抗体为样本，PBS(PH=7.4)作为样品对应的空白对照，先用PBS(PH=7.4)作为空白对照对微量分光光度计进行调节，得到260nm与280nm的吸光值，所测结果在±0.015之间时，就可以对HPV59抗体样本进行检测得到并记录260nm、280nm与320nm的吸光值。

结果依据公式C=(OD280-320)/AU，计算HPV59抗体样本浓度（其中C单位为mg/ml）。

2.2HPV59抗体SDS-PAGE凝胶电泳检测

HPV59抗体生产过程样，原液及成品的纯度分析和分子量测定。用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecylsulphate-polyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE）测定HPV59抗体生产过程样，原液及成品的纯度分析和分子量检测。

2.2.1制胶

将高低两块玻璃平板插入CastingFrame中（矮板面朝外）合上Pressurecames组装成电泳装置中的玻璃平板夹层，然后准备灌胶。往夹层的液面顶部加入灭菌水，凝胶在室内相差不大的温度里聚合30～60min，凝胶聚合，用吸水纸将顶层的水吸干，将浓缩胶液沿矮板边缘加入到玻璃平板夹层中，直至距夹层顶部约0.5cm高为止。灌注完浓缩胶之后，选择模具大小相同、与凝胶厚度相当的Teflon梳子插入浓缩胶里面，继续添加浓缩胶加满整个空间，让浓缩胶室温聚合30～45min。