不同菌根处理条件下冷暖型短柄草的探讨研究(2)

本实验通过筛选,选出冷型(Bd28、Bd26-1)和暖型(Bd15-1,15-2、Bd12-1,12-2)两型短柄草,以其为材料,分别对其接种GM有益菌、RB有害菌、对照三种处理,通


本实验通过筛选,选出冷型(Bd28、Bd26-1)和暖型(Bd15-1,15-2、Bd12-1,12-2)两型短柄草,以其为材料,分别对其接种GM有益菌、RB有害菌、对照三种处理,通过采用红外测温仪,测其倒三叶及植株茎的温度,和测其形态指标和一些生理指标(如:叶绿素的含量、过氧化物酶的活力、过氧化氢酶的活力等)通过对比,从而来研究冷、暖型短柄草在菌根互作条件下所表现出的综合状况及其机理的变化,为农业的高产高效种植提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 实验仪器和试剂

   本实验所用的仪器及试剂由周口师范学院生命科学与农学学院四楼实验室提供。

   实验仪器:红外测温仪、尺子、黑暗温箱、可见光分光光度计、低速低温离心机、紫外可见光分光光度计、精密电子天平、移液枪、pH计、恒温水浴锅等。

   实验试剂:95%的乙醇、0.05mol/LpH5.5磷酸缓冲液、0.05mol/L愈创木酚、2%H2O2、20%三氯乙酸、0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液、0.1mol/LH2O2、蒸馏水等。

1.2供试材料及其培养

1.2.1短柄草的培养及筛选

短柄草材料Bd28、Bd26-1、Bd15-1,15-2、Bd12-1,12-2,由植物遗传与分子育种重点实验室张怡老师提供。

培养:营养土和蛭石按照1:1的比例进行配置,之后灭菌半小时,然后将其装入托盘中,种植Bd28、Bd26-1、Bd15-1,15-2、Bd12-1,12-2四种短柄草材料。

浇水:每2 3天对其浇一次蒸馏水。

材料筛选:种植16个品种,连续种植2批,每批数据均在长出3片真叶以后开始记录数据,之后以其方差为标准,选出冷型(Bd28、Bd26-1)和暖型(Bd15-1,15-2、Bd12-1,12-2)两型短柄草。

1.2.2实验设计

对冷型短柄草品种:Bd28、Bd26-1,暖型短柄草品种Bd15-1,15-2、Bd12-1,12-2,及其有益菌,有害菌菌根互作的冷、暖型短柄草,每个品种设一个对照处理,分别做六次重复。

1.2.3接种方法

有益菌(GM)的接种:将有益菌(GM)混在营养土中,之后直接种植四种品种的材料;

有害菌(RB)的接种:在短柄草长出3-4cm时,使用注射器,将有害菌(RB)分别注射到材料的根部来接种有害菌。

1.3温度的测定

国内外关于植物温度的相关研究方面已经很多,其中,冠层温度已在判别作物水分状况[2-3]、抗旱基因型作物的筛选[4-5]、抗热胁迫基因型作物的筛选[6]等方面取得了大的进展。本实验通过采用红外测温仪,分别对所培养的短柄草的倒三叶及其植株茎进行测量分别测出其温度,从出苗到收获每3天测一次。