2.3.2 侧根数目、主根根长的统计

配制一定浓度梯度的含 NaCl 的 MS 固体培养基，NaCl 浓度分别为：0mM，50mM， 100mM，125mM，150mM，175mM，200mM，每组浓度设置 4 个独立重复实验组。 先把种子播种在正常的 MS（1.2%Agar）固体培养基上，播种结束后置于 4℃冰箱内春化 处理 2 天时间，培养皿需竖直放置于架子上。春化结束后将培养皿转到培养室中培养 4 天， 培养室 的环 境条 件为 ： 温度 22-25 ℃， 光 周期为 16h 光照 8h 黑暗， 光照强 度为 100-150umol/m2s。待小苗长至长约 1cm 时，在超净工作台中进行移苗操作，用镊子将小 苗贴到处理所用的方皿上，每块培养皿平均分为 2 块，左边贴野生型，右边贴转基因植株，两种株系各贴 6 株，且所有的小苗根尖应在同一条水平线上，并以该线作为生长的基准线。

贴苗完成后，把方皿竖直放置于架子上，放回培养室继续培养，使小苗竖直贴着平皿生长    7天。第 8 天，从基准线开始测量七天内主根根长的增长量（即移苗后所伸长的主根长度值）， 且统计每株小苗的侧根数目（侧根以肉眼能看到的为准）。最后进行统计学分析，比较过表 达株系和野生型拟南芥的实验数据差异。

3   结果与分析

3.1 盐胁迫对转基因拟南芥萌发率的影响

如图 1.1 所示，在不添加 NaCl 的 MS 培养基上，在萌发过程中 Col-0 和 OV-52-3 两 个株系萌发率较高，而 OV-77-5 和 OV-80-14 株系萌发率稍低，但四个拟南芥株系均能达 到 90%以上的高萌发率。在添加有 150mM NaCl 的 MS 培养基上，野生型 Col-0 和 3 个 过表达株系的种子萌发率最终都趋于 95%，但在萌发过程中不同株系的萌发率存在较大的 差异。在萌发前期，野生型 Col-0 拟南芥种子萌发率始终高于转基因拟南芥，在种子萌发 的第 2d，野生型 Col-0 萌发率为 71.9%，而过表达 3 个株系 OV-52-3、OV-77-5 和 OV-80-14 的萌发率分别为 50.13%、40.21%、38.75%。此后 3 个转 OsSTSL2 基因株系 的拟南芥种子萌发率随时间推移逐渐提高，萌发第 2.5d，野生型和过表达拟南芥的萌发率 差异缩小到 12.34%，其中 OV-77-5 仅次于 Col-0 萌发率，而 OV-52-3 萌发率较低， OV-80-14 株系萌发率最低，为 77.84%。种子萌发 3d 以后，野生型和过表达株系的萌发 率无明显差异，都达到了 92.43%的高萌发率。

将 MS 培养基中的 NaCl 浓度提高到 200mM，在种子萌发的 1.5～2.5d 期间，4 个株系的萌发率均随时间大幅度上升。萌发率大小关系为：野生型 Col-0 的萌发率最高，OV-52-3 株系次之，OV-80-14 株系萌发率稍低，OV-77-5 株系最低。而在种子萌发中期，OV-52-3 和 OV-77-5 株系的萌发率仍呈大幅提高趋势并接近于野生型 Col-0 的萌发率，而 OV-80-14 株系的萌发率较其他株系低 7%。种子萌发后期，Col-0 和 3 个过表达株系的萌发率无明显差异。