2.2.2 Cell Counting Kit-8（CCK8）测定及原理

CCK8试剂中含有WST含有理其化学名称为：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]，在电子载体的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲染料（Formazan dye）。生成的甲物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。以只有细胞的孔为对照组、仅有培养基的孔为空白组，将实验组暴露在药物溶液中12 h后，向每孔加入10 µL的CCK8溶液，将培养板在培养箱内孵育 1-4小时，用酶标仪测定在450nm处的吸光度（OD）。细胞抑制率的计算公式为：

其中，以对照组RTE细胞活性为100 ％。

2.2.3 活性氧ROS测定及原理

荧光探针DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内，细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，检测荧光即可了解活性氧水平。对照组（仅含有RTE细胞而不含药物的孔）和实验组置于细胞培养箱中孵化12小时后，按照活性氧（ROS）检测试剂盒说明操作，用酶标仪检测孔中的荧光强度变化，由荧光变化的强度来反映细胞中ROS的变化规律。检测中的激发波长为488 nm，发射波长为525 nm。